In vitro μελέτη της δράσης της imiquimod σε απομονωμένους κυτταρικούς πληθυσμούς περιφερικού αίματος ασθενών με recurrent herpes labialis και υγιείς μάρτυρες

dc.contributor.advisorΜουζάκη, Αθανασία
dc.contributor.authorΚοσμά, Μαριάνθη
dc.contributor.committeeΜουζάκη, Αθανασία
dc.contributor.committeeΤσαμπάος, Διονύσιος
dc.contributor.committeeΠασματζή, Ευσταθία
dc.contributor.otherKosma, Marianthi
dc.date.accessioned2016-01-07T07:20:08Z
dc.date.available2016-01-07T07:20:08Z
dc.date.copyright2015
dc.degreeΜεταπτυχιακή Εργασίαel
dc.description.abstractΗ ιμικουϊμόδη είναι μία ιμιδαζοκινολίνη, αγωνιστής του TLR7 με ανοσοτροποποιητική και αντι-ιική δράση. Στην παρούσα εργασία μελετήθηκε η συστηματική ανοσοτροποποιητική δράση που μπορεί να ασκεί η ιμικουϊμόδη σε συγκεκριμένους κυτταρικούς πληθυσμούς λευκών αιμοσφαιρίων σε ασθενείς με υποτροπιάζουσες λοιμώξεις από επιχείλιο έρπη (recurrent Herpes labialis) και ιούς των ανθρώπινων θηλωμάτων (Human papilomavirus). Αναλυτικότερα καταγράφηκε το προφίλ της γονιδιακής έκφρασης των κυτταροκινών IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, IL-12, IL-17, TNF-α, TGF-β1, IFN-α ,IFN-γ και του μεταγραφικού παράγοντα FoxP3, σε καθαρούς κυτταρικούς πληθυσμούς CD14+ καθώς και CD3+CD25+ Τ κυττάρων, CD3+CD8+CD25- και CD3+CD4+CD25- Τ κυττάρων. Μονοπύρηνα κύτταρα περιφερικού αίματος απομονώθηκαν από ασθενείς και υγιείς δότες. Τα κύτταρα αυτά καλλιεργήθηκαν παρουσία και απουσία ιμικουϊμόδης για 24 ώρες. Στο τέλος της καλλιέργειας, απομονώθηκαν οι πληθυσμοί των CD14+, CD3+CD25+, CD3+CD8+CD25-, CD3+CD4+CD25- T-κυττάρων με μαγνητικά σφαιρίδια. Ακολούθησε απομόνωση ολικού RNA, αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης με αντίστροφη μεταγραφή (RT-PCR ανάλυση), για τον προσδιορισμό των επιπέδων γονιδιακής έκφρασης κυτταροκινών και του μεταγραφικού παράγοντα FoxP3. Η ανάλυση των προϊόντων της αλυσιδωτής αντίδρασης πολυμεράσης (PCR) έγινε με ηλεκτροφόρηση σε πήκτωμα αγαρόζης. Από τα αποτελέσματα συμπεραίνουμε ότι η ιμικουϊμόδη διεγείρει την έκφραση των γονιδίων της IL-6, IL-10, και του ΤΝF-α στα μονοκύτταρα των υγιών ατόμων καθώς και στους ασθενείς με υποτροπιάζουσες λοιμώξεις από επιχείλιο έρπητα (Herpes labialis) και ιούς των ανθρώπινων θηλωμάτων (Human papilomaviruses). Ακόμα επηρέασε σημαντικά την έκφραση της IL-17 στα CD3+CD4+CD25- βοηθητικά Τ-λεμφοκύτταρα του ασθενή που βρισκόταν σε έξαρση. Τα επίπεδα του μεταγραφικού παράγοντα FoxP3 μειώθηκαν στα CD3+CD25+ κύτταρα των υγιών ατόμων και αύξηθηκαν στους ασθενείς μετά από καλλιέργεια με ιμικουϊμόδη. Η ιμικουϊμόδη προκαλεί μία πόλωση προς τις κυτταροκίνες τύπου 1 στα μονοκύτταρα των ασθενων με υποτροπιάζουσες λοιμώξεις από επιχείλιο έρπητα (Herpes labialis) και από ιούς των ανθρώπινων θηλωμάτων (Human papilomavirouses-HPV) που βρίσκονται σε ύφεση και στους υγιείς, ενώ δεν έχει το ίδιο αποτέλεσμα στον ασθενή με επιχείλιο έρπητα σε έξαρση. Η προσθήκη ιμικουϊμόδης στις καλλιέργειες των κυττάρων οδήγησε σε ένα Th1 προφίλ έκφρασης κυτταροκινών από τα CD3+CD4+CD25- κύτταρα του ασθενή που βρίσκονταν σε έξαρση. Ένας πιθανός μηχανισμός δράσεως της ιμικουϊμόδης στους ασθενείς είναι η ενεργοποίηση του TLR7 που οδηγεί στην ενεργοποίηση του MyD-88 σηματοδοτικού μονοπατιού και στην απελευθέρωση του μεταγραφικού παράγοντα NF-kB από τον καταστολέα του IκB. Έτσι εκκρίνονται φλεγμονώδεις κυτταροκίνες και διεγείρεται η αντι-ιική δραστηριότητα. Τα in vitro ευρήματά μας δεν είναι δυνατόν να αναχθούν στις in vivo συνθήκες, επιτρέπουν όμως τη διατύπωση της υποθέσεως ότι η ιμικουϊμόδη μπορεί να επάγει την φυσική ανοσία καθώς και στοχευμένες αντι-ιικές αντιδράσεις στους ασθενείς με υποτροπιάζουσες λοιμώξεις που βρίσκονται σε ύφεση. Στον ασθενή με επιχείλιο έρπη σε έξαρση επηρεάζει τα βοηθητικά Τ-λεμφοκύτταρα και τα οδηγεί σε μία Th1 απόκριση. Η αξιολόγηση κλινικών και in vitro δεδομένων οδηγεί στο συμπέρασμα ότι η ιμικουϊμόδη ίσως αποτελέσει μία αποτελεσματική θεραπεία κατά των λοιμώξεων από ιούς των ανθρώπινων θηλωμάτων καθώς και κατά των υποτροπιάζουσων λοιμώξεων από επιχείλιο έρπητα (HPV και RHL λοιμώξεων).el
dc.description.translatedabstractIn this study we investigate the influence of imiquimod, an imidazoquinoline with antiviral activity and agonist of TLR7 on systemic immunity of patients with recurrent Herpes labialis and Human papillomavirus infections. The main purpose of this study was to determine the gene expression profiles of the cytokines IL-2, IL-6, IL-10, IL-12, IL17, IFN-γ, IFN-α, TNF-α, TGF-β1 and of the transcription factor FoxP3, in certain cell populations with or without imiquimod. Peripheral Blood Mononuclear Cells (PBMC) from patients with recurrent Herpes labialis (RHL) and Human Papilomavirus (HPV) and controls were cultivated with or without imiquimod. After 24 hours, CD14+, CD3+CD25+, CD3+CD8+CD25+, CD8-CD4+CD25- cell populations were isolated with magnetic beads. RNA was extracted and cDNA was constructed in order to estimate the gene expression of cytokines with RT-PCR. Evaluation of PCR products was performed by electrophoresis and quantification was performed using the appropriate software programme. Our results show that imiquimod increased the baseline expression of IL-6, IL-10 and TNF-α in CD14+ cells of patients with HPV and RHL and of healthy individuals. It decreased FoxP3 expression in CD3+CD25+ cells of healthy individuals and increased it in all patients. It did not affect the expression of IFN-γ in any cell population. It influenced the expression of IL-17 gene in T helper cells of patient in relapse. Imiquimod caused a polarization towards type 1 cytokines in monocytes of patients with recurrent infections of Herpes labialis and HPV in remission and healthy controls while not having the same effect in patient with Herpes labialis in relapse. Imiquimod affected helper T-cells of patient with Herpes labialis in relapse and lead to a Th1 response. A possible mechanism to explain these changes in CD14 cells of patients in remission might be the activation of TLR7 and the cascade of the MyD-88-dependent pathway that activates transcription factor NF-kB. This triggers the secretion of inflammatory cytokines and stimulates antiviral activity. In conclusion, our in vitro findings can not be reduced to the in vivo conditions, but allow a formulation of the case that imiquimod can promote in vitro innate immunity and target antiviral responses in patients with recurrent infections that are in remission. Evaluation of clinical and in vitro data suggests that imiquimod may represent an effective treatment against HPV and RHL infections.el
dc.identifier.urihttp://hdl.handle.net/10889/9004
dc.language.isogrel
dc.rights6el
dc.subjectΙμικουϊμόδηel
dc.subjectΕπιχείλιος έρπηςel
dc.subjectΑνθρώπινα θηλώματαel
dc.subject.alternativeImiquimodel
dc.subject.alternativeRecurrent herpes labialisel
dc.subject.alternativeHuman papilomavirusel
dc.subject.ddc615.792 4el
dc.titleIn vitro μελέτη της δράσης της imiquimod σε απομονωμένους κυτταρικούς πληθυσμούς περιφερικού αίματος ασθενών με recurrent herpes labialis και υγιείς μάρτυρεςel
dc.typeThesisel

Files

Original bundle
Now showing 1 - 1 of 1
Loading...
Thumbnail Image
Name:
master thesis Kosma M.pdf
Size:
2.84 MB
Format:
Adobe Portable Document Format
License bundle
Now showing 1 - 1 of 1
No Thumbnail Available
Name:
license.txt
Size:
5.05 KB
Format:
Item-specific license agreed upon to submission
Description: