Μοριακή ταυτοποίηση ιχθύων
Loading...
Date
2024-07-18
Authors
Αρβανίτη, Δανάη
Journal Title
Journal ISSN
Volume Title
Publisher
Abstract
Τα αντιδραστήρια σε υγρή μορφή, ευρέως χρησιμοποιούμενα σε ποικίλες εφαρμογές εργαστηρίων, θέτουν σημαντικές προκλήσεις όσον αφορά την αποθήκευση και τη μεταφορά τους. Η διατήρηση της σταθερότητας και της δραστικότητας αυτών, απαιτεί συγκεκριμένες συνθήκες, όπως χαμηλές θερμοκρασίες, επιβάλλοντας τη χρήση ψυχρής αλυσίδας, η οποία μπορεί να είναι ιδιαίτερα δαπανηρή για εκτεταμένες περιόδους ή για αποστολές σε μεγάλες αποστάσεις. Ιδιαίτερη πρόκληση αποτελούν τα αντιδραστήρια της Αλυσιδωτής Αντίδρασης Πολυμεράσης (PCR), μιας κομβικής τεχνικής στη μοριακή βιολογία για την ενίσχυση του DNA. Αυτή η πρόκληση σχετίζεται κυρίως με τα ένζυμα, τα οποία είναι ιδιαίτερα ευαίσθητα στην αποικοδόμηση και απαιτούν τη διατήρηση της δομικής τους ακεραιότητας για να παραμένουν λειτουργικά. Η σταθερότητά τους είναι πολύ σημαντική για αξιόπιστα αποτελέσματα ενίσχυσης.
Στην παρούσα διπλωματική, θα μελετηθεί η λυοφιλίωση για την αντιμετώπιση αυτών των προκλήσεων. Η μετατροπή των υγρών αντιδραστηρίων σε μια σταθερή, ξηρή σκόνη, ενισχύει σημαντικά τη διάρκεια ζωής τους και απλοποιεί την διαδικασία αποθήκευσης και μεταφοράς. Η διαδικασία αυτή περιλαμβάνει την κατάψυξη των υγρών αντιδραστηρίων και στη συνέχεια τη μείωση της πίεσης ώστε το περιεχόμενο παγωμένο νερό να εξαχνωθεί. Το αποτέλεσμα είναι ένα αφυδατωμένο προϊόν που διατηρεί τόσο την ακεραιότητα όσο και τη λειτουργικότητα του αρχικού υγρού αντιδραστηρίου, επιτρέποντας την εύκολη αποθήκευσή του χωρίς την ανάγκη για πολύ χαμηλές θερμοκρασίες.
Εστιάζοντας ειδικά στην PCR, η προκειμένη εργασία προχωράει ένα βήμα παρακάτω και επικεντρώνεται στο να βρίσκονται όλα τα αντιδραστήρια σε ένα μόνο, προ-αναμεμειγμένο σωληνάριο λυοφιλιωμένα. Αυτή η καινοτομία απλοποιεί την προετοιμασία των αντιδράσεων PCR, μειώνοντας σημαντικά την πιθανότητα σφαλμάτων και μόλυνσης με πιπέτα. Προσφέρει ευκολία στη χρήση και αξιοπιστία και όταν χρειάζεται να πραγματοποιηθεί μια PCR, το μίγμα θα είναι ήδη έτοιμο και θα απαιτείται μόνο ανασύσταση και προσθήκη DNA.
Για την διερεύνηση επιλέχθηκε αλληλουχία DNA του γαύρου ως αναλύτης. Ο γαύρος, γνωστός για την υψηλή θρεπτική του αξία, είναι συχνή επιλογή στη διατροφή και γι’αυτό απαιτεί ποιοτικό έλεγχο στον τομέα των τροφίμων για να εξασφαλιστεί η ασφάλεια και η ποιότητά του για τον καταναλωτή. Λόγω της ευρείας χρήσης του, ο γαύρος μπορεί να αντιμετωπίζει θέματα νοθείας, ενώ πρέπει επίσης να ελέγχεται και ως αλλεργιογόνο συστατικό. Για αυτούς τους λόγους, το DNA του γαύρου αποτελεί στόχο για να αποδειχθεί η αποτελεσματικότητα των επιλεγμένων μεθόδων μας.
Για την ανίχνευση ειδικών αλληλουχιών DNA του γαύρου, χρησιμοποιώντας λυοφιλιωμένα προπαρασκευασμένα μίγματα PCR, επιλέχθηκαν οι βιοαισθητήρες τύπου ταινίας ξηρών αντιδραστηρίων λόγω της απλότητας, της ταχύτητας και της αξιοπιστίας τους. Η ανίχνευση πραγματοποιείται δια γυμνού οφθαλμού διευκολύνοντας την ερμηνεία των αποτελεσμάτων χωρίς την ανάγκη για εξειδικευμένο εξοπλισμό. Ενσωματώνοντας τα οφέλη της λυοφιλίωσης με την αποτελεσματικότητα των βιοαισθητήρων, η προσέγγιση αυτής της μελέτης στοχεύει να παρέχει μια ισχυρή και προσιτή μέθοδο για την ανίχνευση του γαύρου με έτοιμα μίγματα PCR.
Description
Keywords
Λυοφιλίωση, Βιοαισθητήρας τύπου ταινίας ξηρών αντιδραστηρίων, Νανοσωματίδια χρυσού, Αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης (PCR), Ανίχνευση γαύρου