Επικύρωση μεθόδου ανάλυσης των γλυκοζιτών στεβιόλης : Rebaudioside A και Stevioside με υγρή χρωματογραφία υψηλής επίδοσης (HPLC) και προσδιορισμός τους σε ορό αίματος
Loading...
Date
Authors
Λεονάρδου, Βαρβάρα
Journal Title
Journal ISSN
Volume Title
Publisher
Abstract
Εφαρμόστηκε στο εργαστήριο επικυρωμένη μέθοδος ανάλυσης των γλυκοζιτών στεβιόλης Rebaudioside A και Stevioside με υγρή χρωματογραφία υψηλής επίδοσης (HPLC), στο εύρος συγκεντρώσεων 100 – 500 μg/mL. Η ανάλυση έγινε σε στήλη Luna C18 (250 × 4,6 mm), 5 μm, κινητή φάση ΑcCN – ρυθμιστικό διάλυμα φωσφορικών 10 mM (pH 2,6), 32:68 (v/v), ροή 1 mL/min και ανίχνευση στα 210 nm. Ο χρόνος συνκράτησης του γλυκοζίτη Rebaudioside A κυμάνθηκε από 6,862 έως 7,201 min, ενώ του γλυκοζίτη Stevioside από 7,499 έως 7,730 min. Τα όρια ανίχνευσης και ποσοτικοποίησης για τον γλυκοζίτη Rebaudioside A βρέθηκε ότι ήταν 12,658 μg/mL και 38,357 μg/mL, ενώ για τον γλυκοζίτη Stevioside 13,642 μg/mL και 41,34 μg/mL, αντίστοιχα. Η μέθοδος παρουσιάζει γραμμικότητα (R = 0,9987 και 0,9978, αντίστοιχα για κάθε γλυκοζίτη), πιστότητα (RSD≤ 3,7%) και ακρίβεια. Η μέθοδος προσαρμόστηκε στην ανάλυση των γλυκοζιτών αυτών στις συγκεντρώσεις από 1 έως 25 μg/mL. Ο χρόνος συνκράτησης του γλυκοζίτη Rebaudioside A κυμάνθηκε από 6,843 έως 6,975 min, ενώ του γλυκοζίτη Stevioside από 7,148 έως 7,358 min. Τα όρια ανίχνευσης και ποσοτικοποίησης για τον γλυκοζίτη Rebaudioside A βρέθηκε ότι ήταν 0,374 μg/mL και 1,134 μg/mL, ενώ για τον γλυκοζίτη Stevioside 0,22 μg/mL και 0,667 μg/mL, αντίστοιχα. Η μέθοδος παρουσιάζει γραμμικότητα (R = 0,998 και 0,9976, αντίστοιχα για κάθε γλυκοζίτη), πιστότητα (RSD≤ 11%) και ακρίβεια.
Οι γλυκοζίτες αυτοί αναλύθηκαν και σε ορό μετά από εκχύλιση στερεάς φάσης σε φύσιγγες OASIS® HLB. Ουσίες που παρεμποδίζουν την ανάλυση απομακρύνθηκαν με MeOH – φορμικό 1%, 40:60 (v/v) και κατόπιν έγινε ανάκτηση των γλυκοζιτών (72%) με με MeOH – φορμικό 1%, 70:30 (v/v).
Description
Keywords
Επικύρωση μεθόδου ανάλυσης, Γλυκοζίτες στεβιόλης, Υγρή χρωματογραφία υψηλής επίδοση, Εκχύλιση στερεάς φάσης