Φαρμακοκινητική μελέτη καινοτόμων αναστολέων της συσσωμάτωσης της πρωτεΐνης α-α-συνουκλεΐνης
Loading...
Date
2024-07-03
Authors
Μπόλκα, Φωτεινή
Journal Title
Journal ISSN
Volume Title
Publisher
Abstract
Η α-συνουκλεΐνη είναι μια μικρή προσυναπτική πρωτεΐνη που παράγεται στον εγκέφαλο και διαδραματίζει σπουδαίο ρόλο στη μετάβαση ηλεκτρικών σημάτων. Η συσσωματωμένη μορφή της είναι ένα από τα κύρια συστατικά των σωματίων Lewy που εμφανίζονται στη νόσο Parkinson και σε άλλες νευροεκφυλιστικές διαταραχές. Η συσχέτιση της α-συνουκλεΐνης με το νευροεκφυλισμό προέκυψε από την ταυτοποίηση σημειακών μεταλλαγών καθώς και το διπλασιασμό και τριπλασιασμό του γονιδίου σε ένα μικρό αριθμό οικογενειών με αυτοσωμική επικρατή κληρονομικότητα για τη νόσο του Parkinson πρώιμης έναρξης και στην ανακάλυψη ότι αποτελεί το κύριο συστατικό των σωματίων Lewy, που ανευρίσκονται τόσο στην οικογενή όσο και στη σποραδική μορφή της ασθένειας.
Η νόσος Parkinson είναι η δεύτερη σε συχνότητα νευροεκφυλιστική ασθένεια παγκοσμίως μετά τη νόσο Alzheimer και οφείλεται στον εκφυλισμό των ντοπαμινεργικών νευρώνων της μέλαινας ουσίας και των νευρικών τους απολήξεων.
Σκοπός της παρούσας έρευνας, είναι η ανακάλυψη νέων αποτελεσματικών μικρομοριακών αναστολέων της δημιουργίας νευροτοξικών συσσωματωμάτων της πρωτεΐνης α-συνουκλεΐνης. Για τη μελέτη αυτών, αναγκαία υπήρξε η ανάπτυξη αναλυτικών μεθοδολογιών. Οι πιθανοί μικρομοριακοί αναστολείς είναι τα κυκλικά πεπτίδια CWSR και THRR και ως εκ τούτου, αρχικά αναπτύχθηκε μια ευαίσθητη αναλυτική μεθοδολογία, που βασίστηκε στην τεχνική της υγρής χρωματογραφίας-δίδυμης φασματομετρίας μάζας (LC-MS/MS), διότι συνδυάζει την υψηλή διαχωριστική ικανότητα της υγρής χρωματογραφίας με την εξαιρετικά ευαίσθητη και επιλεκτική ικανότητα ανάλυσης της φασματομετρίας μάζας.
Για την βελτιστοποίηση των χρωματογραφικών συνθηκών για τον προσδιορισμό των πιθανών αναστολέων μελετήθηκαν η επίδραση της κινητής φάσης, οι χρωματογραφικές στήλες, η θερμοκρασία στήλης και το μέσο ανασύστασης του δείγματος.
Επιπροσθέτως, κρίνεται απαραίτητο να αναπτυχθεί μια μέθοδος προ-κατεργασίας των πεπτιδίων σε βιολογικά υγρά και δεδομένου του ότι η μέθοδος αυτή περιλαμβάνει εκχύλιση απαραίτητη είναι η απομάκρυνση των ανεπιθύμητων συστατικών.
Για την επικύρωση της μεθόδου, ακολουθήθηκαν οι επίσημοι οδηγοί του Οργανισμού Ελέγχου Φαρμάκων και Τροφίμων (FDA) και του Ευρωπαϊκού Οργανισμού Φαρμάκων (EMA). Συγκεκριμένα, μελετήθηκε η γραμμικότητα, η ευαισθησία της μεθόδου, η πιστότητα, η ακρίβεια και η ορθότητα της. Η σταθερότητα των αναλυτών εντός των εμβολιασμένων δειγμάτων πλάσματος ελέγχθηκε τόσο κατά την παραμονή τους σε θερμοκρασία περιβάλλοντος, όσο και κατά την παραμονή τους στο ψυγείο.
Η μέθοδος, τελικά, παρουσίασε καλή επαναληψιμότητα και γραμμικότητα σε εύρος τιμών από 25-1000 ng/mL, ενώ το υψηλότερο μέχρι στιγμής ποσοστό ανάκτησης σε πλάσμα ανθρώπου βρέθηκε ≈40% .
Η έρευνα απέδειξε ότι το πρωτόκολλο της ανάκτησης που εξετάστηκε για την εκχύλιση των πεπτιδίων στο πλάσμα αίματος ανθρώπου ,δεν έδωσε ικανοποιητικό ποσοστό ανάκτησης, και για αυτό πρέπει να γίνουν ακόμα αρκετές προσπάθειες για την βελτίωση της, με στόχο τη μελέτη της σταθερότητας των πεπτιδίων σε πλάσμα ποντικού, καθώς και τη φαρμακοκινητική μελέτη αυτών.
Description
Keywords
Α-συνουκλεΐνη, Αναστολείς συσσωμάτωσης, Πεπτίδια, Ανάπτυξη αναλυτικής μεθόδου, LC-MS/MS, Επικύρωση μεθόδου