Μελέτη παρασκευής ανοσολιποσωμάτων για στόχευση φλεγμονής με κλασσικές [sic] τεχνικές και τεχνικές ανάμιξης μικροροής (microfluidic mixing)
Loading...
Date
2025-03-21
Authors
Τσίρη, Νικολέτα
Journal Title
Journal ISSN
Volume Title
Publisher
Abstract
Tα λιποσώματα αποτελούν μία προηγμένη νανοτεχνολογία με ευρεία εφαρμογή στη φαρμακευτική και τη θεραπευτική τα τελευταία χρόνια. Πρόκειται για μικροσκοπικά, σφαιρικά νανοσωματίδια που απαρτίζονται κυρίως από φωσφολιπίδια και χοληστερόλη. Χρησιμοποιούνται ως φορείς φαρμακευτικών μορίων, προσφέροντας στοχευμένη χορήγηση και αυξημένη αποτελεσματικότητα. Η δομή τους, με υδατικό πυρήνα και λιπιδική μεμβράνη, επιτρέπει τη μεταφορά τόσο υδρόφιλων όσο και λιπόφιλων ουσιών. Διακρίνονται για τη βιοσυμβατότητα, τη στοχευμένη δράση και την ευελιξία των φυσικοχημικών ιδιοτήτων τους, προσφέροντας νέες δυνατότητες στη θεραπευτική.
Η ραγδαία πρόοδος στον τομέα της νανοτεχνολογίας τα τελευταία 20 χρόνια έχει οδηγήσει στην έγκριση πολλών λιποσωμικών φαρμάκων, καθώς και στην ανάπτυξη καινοτόμων βιοϊατρικών προϊόντων. Ως αποτέλεσμα, τα λιποσώματα διαδραματίζουν πλέον καίριο ρόλο στη θεραπεία διαφόρων παθήσεων, ενισχύοντας τις δυνατότητες της σύγχρονης ιατρικής.
Μία κατηγορία λιποσωμάτων, τα ανοσολιποσώματα, επιτρέπουν την αποτελεσματική πρόσδεση μονοκλωνικών αντισωμάτων στην επιφάνειά τους, διευκολύνοντας τη στοχευμένη μεταφορά φαρμάκων στις φλεγμονώδεις περιοχές και μειώνοντας τις παρενέργειες σε υγιείς ιστούς. Στόχος της παρούσας μεταπτυχιακής εργασίας είναι η παρασκευή και μελέτη ανοσολιποσωμάτων που φέρουν στην επιφάνειά τους το μονοκλωνικό αντίσωμα κατά του υποδοχέα E-selectin (CD62E) με διαφορετικές τεχνικές, μία συμβατική και δύο τεχνικές που περιλαμβάνουν τη χρήση συσκευής ανάμιξης με μικροροή (Microfluidic mixing ή Microfluidic flow focusing). Ο συγκεκριμένος υποδοχέας εκφράζεται στα ενδοθηλιακά κύτταρα κατά τη διάρκεια φλεγμονής, προσφέροντας έτσι ένα ιδανικό στόχο για τη θεραπεία φλεγμονωδών καταστάσεων.
Η πρόσδεση του μονοκλωνικού αντισώματος στην επιφάνεια των λιποσωμάτων πραγματοποιήθηκε μέσω θειοαιθερικού δεσμού. Παρασκευάστηκαν λιποσώματα (DSPC/Chol/PEG-methoxy/Rhodamine σε αναλογία mol 2:1:0.08:0.5) με συμβατική τεχνική ενυδάτωσης λεπτού υμενίου και με χρήση τεχνικής ανάμιξης με μικροροή (Microfluidic mixing). Τα ανοσολιποσώματα χαρακτηρίστηκαν ως προς το ποσοστό διασύνδεσης του αντισώματος στην επιφάνεια τους μέσω της μεθόδου BCA καθώς και τα ως προς το μέγεθος, το δείκτη πολυδιασποράς και το ζήτα δυναμικό τους με τη χρήση μεθόδου DLS.
Ύστερα, ακολούθησαν οι μελέτες σταθερότητά τους υπό διαφορετικές συνθήκες αποθήκευσης, καθώς και in vitro μελέτες αλληλεπίδρασης των ανοσολιποσωμάτων με τη χρήση ανθρώπινων αθανατοποιημένων ενδοθηλιακών κυττάρων του εγκεφάλου (hBMEC/d3).
Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι επιτυγχάνεται υψηλό ποσοστό διασύνδεσης του αντισώματος anti-human CD62E με όλες τις μεθόδους παρασκευής (80-85 %) με τη χρήση θειοαιθερικού δεσμού. Επιπλέον το μέγεθος των ανοσολιποσωμάτων που παρασκευάστηκαν εξ ολοκλήρου με Microfluidic mixing (138 nm) ήταν μικρότερο συγκριτικά με τη συμβατική μέθοδο και Microfluidic mixing με προ-σχηματισμένα λιποσώματα (209-238 nm).
Όσον αφορά τις μελέτες σταθερότητας, τα ανοσολιποσώματα παρέμειναν σταθερά ως προς το μέγεθος και τον δείκτη πολυδιασποράς για 30 ημέρες. Στη σταθερότητα σε ρυθμιστικό διάλυμα PBS, τα ανοσολιποσώματα διατήρησαν τη σταθερότητά τους για 48 ώρες, ενώ σε διάλυμα ορού πρωτεϊνών FBS παρουσίασαν σημαντική πτώση συγκράτησης της καλσεΐνης από τις 24 ώρες (κατά 40%), υποδεικνύοντας ευαισθησία σε πρωτεϊνικές αλληλεπιδράσεις.
Description
Keywords
Λιποσώματα, Μονοκλωνικό αντίσωμα, Στόχευση φλεγμονής, Φλεγμονή