Μελέτη παρασκευής ανοσολιποσωμάτων για στόχευση φλεγμονής με κλασσικές [sic] τεχνικές και τεχνικές ανάμιξης μικροροής (microfluidic mixing)
| datacite.contributor.RelatedPerson | Μαραζιώτη, Αντωνία | |
| datacite.contributor.RelatedPerson | Μουρτάς, Σπυρίδων | |
| datacite.contributor.Supervisor | Αντιμησιάρη, Σοφία | |
| dc.contributor.author | Τσίρη, Νικολέτα | |
| dc.contributor.other | Tsiri, Nikoleta | |
| dc.date.accessioned | 2025-04-24T06:17:39Z | |
| dc.date.available | 2025-04-24T06:17:39Z | |
| dc.date.issued | 2025-03-21 | |
| dc.degree | masterThesis | |
| dc.description.abstract | Tα λιποσώματα αποτελούν μία προηγμένη νανοτεχνολογία με ευρεία εφαρμογή στη φαρμακευτική και τη θεραπευτική τα τελευταία χρόνια. Πρόκειται για μικροσκοπικά, σφαιρικά νανοσωματίδια που απαρτίζονται κυρίως από φωσφολιπίδια και χοληστερόλη. Χρησιμοποιούνται ως φορείς φαρμακευτικών μορίων, προσφέροντας στοχευμένη χορήγηση και αυξημένη αποτελεσματικότητα. Η δομή τους, με υδατικό πυρήνα και λιπιδική μεμβράνη, επιτρέπει τη μεταφορά τόσο υδρόφιλων όσο και λιπόφιλων ουσιών. Διακρίνονται για τη βιοσυμβατότητα, τη στοχευμένη δράση και την ευελιξία των φυσικοχημικών ιδιοτήτων τους, προσφέροντας νέες δυνατότητες στη θεραπευτική. Η ραγδαία πρόοδος στον τομέα της νανοτεχνολογίας τα τελευταία 20 χρόνια έχει οδηγήσει στην έγκριση πολλών λιποσωμικών φαρμάκων, καθώς και στην ανάπτυξη καινοτόμων βιοϊατρικών προϊόντων. Ως αποτέλεσμα, τα λιποσώματα διαδραματίζουν πλέον καίριο ρόλο στη θεραπεία διαφόρων παθήσεων, ενισχύοντας τις δυνατότητες της σύγχρονης ιατρικής. Μία κατηγορία λιποσωμάτων, τα ανοσολιποσώματα, επιτρέπουν την αποτελεσματική πρόσδεση μονοκλωνικών αντισωμάτων στην επιφάνειά τους, διευκολύνοντας τη στοχευμένη μεταφορά φαρμάκων στις φλεγμονώδεις περιοχές και μειώνοντας τις παρενέργειες σε υγιείς ιστούς. Στόχος της παρούσας μεταπτυχιακής εργασίας είναι η παρασκευή και μελέτη ανοσολιποσωμάτων που φέρουν στην επιφάνειά τους το μονοκλωνικό αντίσωμα κατά του υποδοχέα E-selectin (CD62E) με διαφορετικές τεχνικές, μία συμβατική και δύο τεχνικές που περιλαμβάνουν τη χρήση συσκευής ανάμιξης με μικροροή (Microfluidic mixing ή Microfluidic flow focusing). Ο συγκεκριμένος υποδοχέας εκφράζεται στα ενδοθηλιακά κύτταρα κατά τη διάρκεια φλεγμονής, προσφέροντας έτσι ένα ιδανικό στόχο για τη θεραπεία φλεγμονωδών καταστάσεων. Η πρόσδεση του μονοκλωνικού αντισώματος στην επιφάνεια των λιποσωμάτων πραγματοποιήθηκε μέσω θειοαιθερικού δεσμού. Παρασκευάστηκαν λιποσώματα (DSPC/Chol/PEG-methoxy/Rhodamine σε αναλογία mol 2:1:0.08:0.5) με συμβατική τεχνική ενυδάτωσης λεπτού υμενίου και με χρήση τεχνικής ανάμιξης με μικροροή (Microfluidic mixing). Τα ανοσολιποσώματα χαρακτηρίστηκαν ως προς το ποσοστό διασύνδεσης του αντισώματος στην επιφάνεια τους μέσω της μεθόδου BCA καθώς και τα ως προς το μέγεθος, το δείκτη πολυδιασποράς και το ζήτα δυναμικό τους με τη χρήση μεθόδου DLS. Ύστερα, ακολούθησαν οι μελέτες σταθερότητά τους υπό διαφορετικές συνθήκες αποθήκευσης, καθώς και in vitro μελέτες αλληλεπίδρασης των ανοσολιποσωμάτων με τη χρήση ανθρώπινων αθανατοποιημένων ενδοθηλιακών κυττάρων του εγκεφάλου (hBMEC/d3). Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι επιτυγχάνεται υψηλό ποσοστό διασύνδεσης του αντισώματος anti-human CD62E με όλες τις μεθόδους παρασκευής (80-85 %) με τη χρήση θειοαιθερικού δεσμού. Επιπλέον το μέγεθος των ανοσολιποσωμάτων που παρασκευάστηκαν εξ ολοκλήρου με Microfluidic mixing (138 nm) ήταν μικρότερο συγκριτικά με τη συμβατική μέθοδο και Microfluidic mixing με προ-σχηματισμένα λιποσώματα (209-238 nm). Όσον αφορά τις μελέτες σταθερότητας, τα ανοσολιποσώματα παρέμειναν σταθερά ως προς το μέγεθος και τον δείκτη πολυδιασποράς για 30 ημέρες. Στη σταθερότητα σε ρυθμιστικό διάλυμα PBS, τα ανοσολιποσώματα διατήρησαν τη σταθερότητά τους για 48 ώρες, ενώ σε διάλυμα ορού πρωτεϊνών FBS παρουσίασαν σημαντική πτώση συγκράτησης της καλσεΐνης από τις 24 ώρες (κατά 40%), υποδεικνύοντας ευαισθησία σε πρωτεϊνικές αλληλεπιδράσεις. | |
| dc.description.translatedabstract | Liposomes are an advanced nanotechnology with wide application in pharmaceuticals and therapeutics in recent years. They are microscopic, spherical nanoparticles composed mainly of phospholipids and cholesterol. They are used as carriers of drug molecules, offering targeted delivery and enhanced efficacy. Their structure, with an aqueous core and lipid bilayer, allows the transport of both hydrophilic and lipophilic substances. They are distinguished for their biocompatibility, targeted activity and flexibility of their physicochemical properties, providing new possibilities in therapeutic applications. The rapid progress in the field of nanotechnology over the last 20 years has led to the approval of several liposomal drugs, as well as the development of innovative biomedical products. As a result, liposomes now play a key role in the treatment of various diseases, enhancing the potential of modern medicine. One category of liposomes, the immunoliposomes, allow efficient binding of monoclonal antibodies to their surface, facilitating targeted drug delivery to inflammatory sites and reducing side effects in healthy tissues. The aim of this master’s thesis is the preparation and study of immunoliposomes functionalized with the monoclonal antibody against the E-selectin receptor (CD62E), using different techniques: one conventional method and two techniques involving a microfluidic mixing device (Microfluidic mixing or Microfluidic flow focusing). This receptor is expressed on endothelial cells during inflammation, thus providing an ideal target for the treatment of inflammatory conditions. Binding of the monoclonal antibody to the surface of liposomes was achieved via thioetheric linkage. Liposomes (DSPC/Chol/PEG-methoxy/Rhodamine in a 2:1:0.08:0.5 mol ratio) were prepared by conventional thin film hydration technique and using a microfluidic mixing technique. The immunoliposomes were characterized for the percentage of antibody binding to their surface using BCA method and the size, polydispersity index and zeta potential using DLS method. Afterward, stability studies were conducted under different storage conditions, as well as in vitro interaction studies of the immunoliposomes using human immortalized brain endothelial cells (hBMEC/d3). The results showed that a high binding rate of anti-human CD62E antibody was achieved by all preparation methods (80-85 %) using thioether bond. Additionally, the size of the immunoliposomes fully prepared by Microfluidic mixing (138 nm) was smaller compared to the conventional method and Microfluidic mixing with pre-formed liposomes (209-238 nm). Regarding stability studies, the immunoliposomes remained stable in terms of size and polydispersity index for 30 days. In PBS buffer, the immunoliposomes maintained their stability for 48 hours, whereas in FBS serum protein solution they showed a significant decrease in calcein retention from 24 hours (by 40%), indicating sensitivity to protein interactions. | |
| dc.identifier.uri | https://hdl.handle.net/10889/29439 | |
| dc.language.iso | el | |
| dc.subject | Λιποσώματα | |
| dc.subject | Μονοκλωνικό αντίσωμα | |
| dc.subject | Στόχευση φλεγμονής | |
| dc.subject | Φλεγμονή | |
| dc.subject.alternative | Liposomes | |
| dc.subject.alternative | Monoclonal antibody | |
| dc.subject.alternative | Targeting inflammation | |
| dc.subject.alternative | Inflammation | |
| dc.title | Μελέτη παρασκευής ανοσολιποσωμάτων για στόχευση φλεγμονής με κλασσικές [sic] τεχνικές και τεχνικές ανάμιξης μικροροής (microfluidic mixing) | |
| dc.title.alternative | Study of preparation of immunoliposomes for targeting inflammation with classical and microfluidic mixing techniques |