Σύνθεση και ανάλυση συζευγμάτων μαννάνης-πεπτιδίου ανοσοκυρίαρχων επιτόπων των πρωτεϊνών της μυελίνης
Loading...
Date
2024-01-31
Authors
Γάτου, Αικατερίνη Μαρία
Journal Title
Journal ISSN
Volume Title
Publisher
Abstract
Σκλήρυνση Κατά Πλάκας (ΣΚΠ) είναι μια κοινή, χρόνια, φλεγμονώδης και αυτοάνοση ασθένεια του Κεντρικού Νευρικού Συστήματος (ΚΝΣ) που οδηγεί στην καταστροφή της μυελίνης και σε νευρική δυσλειτουργία. Στην Πειραματική Αυτοάνοση Εγκεφαλομυελίτιδα (Experimental Autoimmune Encephalomyelitis, EAE), που είναι το πιο ευρέως χρησιμοποιούμενο ζωικό μοντέλο της ΣΚΠ, συμμετέχουν τόσο εγκεφαλογονικά Τ-κύτταρα όσο και Β-κύτταρα.
Η Πρωτεολιπιδική Πρωτεΐνη της Μυελίνης (Proteolipid Protein, PLP) είναι η πιο άφθονη πρωτεΐνη στη μυελίνη του ΚΝΣ. Πρόσφατη έρευνα αποκαλύπτει ότι πεπτιδικό ανάλογο 83 καταλοίπων που συνίσταται από τις δύο εξωκυττάριες θηλιές της PLP (Proteolipid Protein Extracellular Domain, PLPECD ή PLP36-58,179-238) επάγει την ΕΑΕ μέσω της συμμετοχής των Β-κυττάρων, προτείνοντας έτσι ένα νέο μοντέλο αντιγονοπαρουσίασης.
Στην παρούσα μεταπτυχιακή εργασία πραγματοποιήθηκε η σύνθεση ενός τμήματος του συγκεκριμένου πεπτιδικού αναλόγου (PLP198-238). Επιπλέον, σχεδιάστηκαν και συντέθηκαν δύο πεπτιδικά ανάλογα που βασίζονται στο PLPECD: PLP38-58,179,188-197 και PLP38-58. Ο σχεδιασμός πραγματοποιήθηκε αξιοποιώντας τη βάση δεδομένων iedb.org με στόχο την επαγωγή της ΕΑΕ μέσω Β-κυττάρων.
Η πεπτιδική σύνθεση πραγματοποιήθηκε σε στερεή φάση, επί της 2-χλωροτριτυλοχλωριδίου ρητίνης (CLTR-Cl), ακολουθώντας την Fmoc/tBu μεθοδολογία. Ο έλεγχος και η ταυτοποίηση των συντεθειμένων πεπτιδίων πραγματοποιήθηκε με Υγρή Χρωματογραφία Υψηλής Επίδοσης Ανάστροφης Φάσης (RP-HPLC) και με φασματομετρία μάζας ιονισμού από ηλεκτρικό πεδίο με ψεκασμό (ESI-MS). Ο καθαρισμός των συντεθειμένων πεπτιδίων πραγματοποιήθηκε με ημιπαρασκευαστικό RP-HPLC. Επιπρόσθετα, πραγματοποιήθηκε καθαρισμός ορισμένων πεπτιδικών αναλόγων που εμπλέκονται στην ΣΚΠ και είχαν συντεθεί στο εργαστήριο παλαιότερα.
Τέλος, στα πλαίσια της παρούσης μεταπτυχιακής εργασίας συντέθηκε και μελετήθηκε το σύζευγμα του πολυσακχαρίτη μαννάνη με πεπτιδικό ανάλογο της Μυελινικής Γλυκοπρωτεΐνης των Ολιγοδενδριτών (MOG, Myelin Oligodendrocyte Glycoprotein). Αναλυτικότερα, συντέθηκε το σύζευγμα Mannanoxidized-[KG]5MOG35-55(Ser42), το οποίο αναστέλλει την εμφάνιση των συμπτωμάτων στην ΕΑΕ. Ο έλεγχος της ολοκλήρωσης της σύζευξης πραγματοποιήθηκε μέσω ηλεκτροφόρησης σε πηκτή πολυακρυλαμιδίου (Polyacrylamide Gel Electrophoresis, PAGE), παρουσία δωδεκυλοθειϊκού νατρίου (Sodium Dodecyl Sulfate, SDS).
Description
Keywords
Σκλήρυνση κατά πλάκας (ΣΚΠ), Πειραματική αυτοάνοση εγκεφαλομυελίτιδα, Πρωτεολιπιδική πρωτεΐνη της μυελίνης, Μυελινική γλυκοπρωτεΐνη των ολιγοδενδριτών, Πεπτιδική σύνθεση σε στερεή φάση