Σύνθεση και ανάλυση συζευγμάτων μαννάνης-πεπτιδίου ανοσοκυρίαρχων επιτόπων των πρωτεϊνών της μυελίνης
| datacite.contributor.RelatedPerson | Μουρτάς, Σπυρίδων | |
| datacite.contributor.RelatedPerson | Γάτος, Δημήτριος | |
| datacite.contributor.Supervisor | Τσέλιος, Θεόδωρος | |
| dc.contributor.author | Γάτου, Αικατερίνη Μαρία | |
| dc.contributor.other | Gatou, Aikaterini Maria | |
| dc.date.accessioned | 2024-02-02T10:42:31Z | |
| dc.date.available | 2024-02-02T10:42:31Z | |
| dc.date.issued | 2024-01-31 | |
| dc.degree | masterThesis | |
| dc.description.abstract | Σκλήρυνση Κατά Πλάκας (ΣΚΠ) είναι μια κοινή, χρόνια, φλεγμονώδης και αυτοάνοση ασθένεια του Κεντρικού Νευρικού Συστήματος (ΚΝΣ) που οδηγεί στην καταστροφή της μυελίνης και σε νευρική δυσλειτουργία. Στην Πειραματική Αυτοάνοση Εγκεφαλομυελίτιδα (Experimental Autoimmune Encephalomyelitis, EAE), που είναι το πιο ευρέως χρησιμοποιούμενο ζωικό μοντέλο της ΣΚΠ, συμμετέχουν τόσο εγκεφαλογονικά Τ-κύτταρα όσο και Β-κύτταρα. Η Πρωτεολιπιδική Πρωτεΐνη της Μυελίνης (Proteolipid Protein, PLP) είναι η πιο άφθονη πρωτεΐνη στη μυελίνη του ΚΝΣ. Πρόσφατη έρευνα αποκαλύπτει ότι πεπτιδικό ανάλογο 83 καταλοίπων που συνίσταται από τις δύο εξωκυττάριες θηλιές της PLP (Proteolipid Protein Extracellular Domain, PLPECD ή PLP36-58,179-238) επάγει την ΕΑΕ μέσω της συμμετοχής των Β-κυττάρων, προτείνοντας έτσι ένα νέο μοντέλο αντιγονοπαρουσίασης. Στην παρούσα μεταπτυχιακή εργασία πραγματοποιήθηκε η σύνθεση ενός τμήματος του συγκεκριμένου πεπτιδικού αναλόγου (PLP198-238). Επιπλέον, σχεδιάστηκαν και συντέθηκαν δύο πεπτιδικά ανάλογα που βασίζονται στο PLPECD: PLP38-58,179,188-197 και PLP38-58. Ο σχεδιασμός πραγματοποιήθηκε αξιοποιώντας τη βάση δεδομένων iedb.org με στόχο την επαγωγή της ΕΑΕ μέσω Β-κυττάρων. Η πεπτιδική σύνθεση πραγματοποιήθηκε σε στερεή φάση, επί της 2-χλωροτριτυλοχλωριδίου ρητίνης (CLTR-Cl), ακολουθώντας την Fmoc/tBu μεθοδολογία. Ο έλεγχος και η ταυτοποίηση των συντεθειμένων πεπτιδίων πραγματοποιήθηκε με Υγρή Χρωματογραφία Υψηλής Επίδοσης Ανάστροφης Φάσης (RP-HPLC) και με φασματομετρία μάζας ιονισμού από ηλεκτρικό πεδίο με ψεκασμό (ESI-MS). Ο καθαρισμός των συντεθειμένων πεπτιδίων πραγματοποιήθηκε με ημιπαρασκευαστικό RP-HPLC. Επιπρόσθετα, πραγματοποιήθηκε καθαρισμός ορισμένων πεπτιδικών αναλόγων που εμπλέκονται στην ΣΚΠ και είχαν συντεθεί στο εργαστήριο παλαιότερα. Τέλος, στα πλαίσια της παρούσης μεταπτυχιακής εργασίας συντέθηκε και μελετήθηκε το σύζευγμα του πολυσακχαρίτη μαννάνη με πεπτιδικό ανάλογο της Μυελινικής Γλυκοπρωτεΐνης των Ολιγοδενδριτών (MOG, Myelin Oligodendrocyte Glycoprotein). Αναλυτικότερα, συντέθηκε το σύζευγμα Mannanoxidized-[KG]5MOG35-55(Ser42), το οποίο αναστέλλει την εμφάνιση των συμπτωμάτων στην ΕΑΕ. Ο έλεγχος της ολοκλήρωσης της σύζευξης πραγματοποιήθηκε μέσω ηλεκτροφόρησης σε πηκτή πολυακρυλαμιδίου (Polyacrylamide Gel Electrophoresis, PAGE), παρουσία δωδεκυλοθειϊκού νατρίου (Sodium Dodecyl Sulfate, SDS). | |
| dc.description.translatedabstract | Multiple sclerosis (MS) is a common, chronic, inflammatory, and autoimmune disease of the Central Nervous System (CNS) that leads to myelin destruction and nerve dysfunction. In Experimental Autoimmune Encephalomyelitis (EAE), which is the most widely used animal model of MS, both encephalogenic T-cells and B-cells are involved. Proteolipid Protein (PLP) is the most abundant protein in CNS myelin. Recent research reveals that an 83-residue peptide analog consisting of the two extracellular loops of PLP (Proteolipid Protein Extracellular Domain, PLPECD, or PLP36-58,179-238) induces EAE through B-cell involvement, thus suggesting a new model of antigen presentation. In this master thesis, the synthesis of a part of the specific peptide analogue was carried out (PLP198-238). In addition, two PLPECD-based peptide analogs were designed and synthesized: PLP38-58,179,188-197 and PLP38-58. The design was performed using the iedb.org database aimed at B-cell-mediated EAE induction. The synthesis of the peptide sequences was performed in solid phase, on 2-chlorotrityl chloride resin (CLTR-Cl), following the Fmoc/tBu methodology. Analysis and identification of the synthesized peptides were performed by Reversed Phase High Performance Liquid Chromatography (RP-HPLC) and electrospray ionization mass spectrometry (ESI-MS). The purification of synthesized molecules was carried out using semi-preparative RP-HPLC. In addition, purification of some peptide analogs involved in MS and previously synthesized in the laboratory was performed. Finally, in the context of this master thesis, the conjugate of the polysaccharide mannan with a peptide analog of Myelin Oligodendrocyte Glycoprotein (MOG) was developed. More specifically, the Mannanoxidized-[KG]5MOG35-55(Ser42) conjugation, that inhibits the onset of symptoms in EAE, was synthesized and analyzed. The completion of conjugation was checked by Polyacrylamide Gel Electrophoresis (PAGE), in the presence of Sodium Dodecyl Sulfate (SDS). | |
| dc.identifier.uri | https://hdl.handle.net/10889/26465 | |
| dc.language.iso | el | |
| dc.rights | CC0 1.0 Universal | * |
| dc.rights.uri | http://creativecommons.org/publicdomain/zero/1.0/ | * |
| dc.subject | Σκλήρυνση κατά πλάκας (ΣΚΠ) | |
| dc.subject | Πειραματική αυτοάνοση εγκεφαλομυελίτιδα | |
| dc.subject | Πρωτεολιπιδική πρωτεΐνη της μυελίνης | |
| dc.subject | Μυελινική γλυκοπρωτεΐνη των ολιγοδενδριτών | |
| dc.subject | Πεπτιδική σύνθεση σε στερεή φάση | |
| dc.subject.alternative | Multiple sclerosis (MS) | |
| dc.subject.alternative | Experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) | |
| dc.subject.alternative | Myelin proteolipid protein (PLP) | |
| dc.subject.alternative | Myelin oligodendritic glycoprotein (MOG) | |
| dc.subject.alternative | Solid phase peptide synthesis (SPPS) | |
| dc.title | Σύνθεση και ανάλυση συζευγμάτων μαννάνης-πεπτιδίου ανοσοκυρίαρχων επιτόπων των πρωτεϊνών της μυελίνης | |
| dc.title.alternative | Synthesis and analysis of mannan-peptide conjugates of immunodominant epitopes of myelin proteins |