Μοριακή μέθοδος ελέγχου της αυθεντικότητας του ελαιολάδου
| datacite.contributor.RelatedPerson | Καλογιάννη, Δέσποινα | |
| datacite.contributor.RelatedPerson | Μπεκατώρου, Αργυρώ | |
| datacite.contributor.Supervisor | Χριστόπουλος, Θεόδωρος | |
| dc.contributor.author | Μπέλλου, Νικολέτα | |
| dc.contributor.other | Bellou, Nikoleta | |
| dc.date.accessioned | 2024-05-14T06:16:50Z | |
| dc.date.available | 2024-05-14T06:16:50Z | |
| dc.date.issued | 2024-04-25 | |
| dc.degree | masterThesis | |
| dc.description.abstract | Τις τελευταίες δεκαετίες έχει αναπτυχθεί μεγάλος αριθμός αναλυτικών μεθόδων για την ανίχνευση της νοθείας του ελαιολάδου από άλλα φυτικά έλαια. Οι κύριες κατηγορίες περιλαμβάνουν χρωματογραφικές και φασματοσκοπικές μεθόδους όπως HPLC, GC, NMR, FT-IR και MS. Οι αναλύτες όμως, που ανιχνεύονται με αυτές τις μεθόδους είναι χημικά συστατικά (μεταβολίτες), των οποίων η συγκέντρωση και η δομή μπορεί να διαφέρει μεταξύ των ποικιλιών, των γεωγραφικών περιοχών ανάπτυξης και των περιβαλλοντικών και καιρικών συνθηκών. Αυτό έχει προκαλέσει αυξανόμενο ενδιαφέρον για την ανάπτυξη μοριακών μεθόδων, καθώς η αλληλουχία DNA του φυτικού ελαίου συνδέεται αποκλειστικά με το είδος ή τις ποικιλίες και δεν επηρεάζεται από περιβαλλοντικούς παράγοντες. Οι βιοαισθητήρες αποτελούν μία από τις νεότερες και πιο καινοτόμες στρατηγικές ανίχνευσης νοθείας ελαιόλαδου με άλλα φυτικά έλαια. Στην παρούσα μεταπτυχιακή διπλωματική εργασία, αναπτύχθηκε μία νέα μοριακή μέθοδος που επιτρέπει την ανίχνευση νοθείας ελαιόλαδου από άλλα φυτικά έλαια. Η μέθοδος περιλαμβάνει τρία στάδια: την απομόνωση DNA από πέντε είδη φυτικών ελαίων, την ενίσχυση ειδικών αλληλουχιών με PCR χρησιμοποιώντας μείγμα ειδικών για κάθε φυτικό έλαιο εκκινητών και τέλος, την ανίχνευση των προϊόντων της PCR με πολλαπλό βιοαισθητήρα τύπου ταινίας ξηρών αντιδραστηρίων. Η ύπαρξη νοθείας επιβεβαιώνεται από την εμφάνιση ερυθρής κηλίδας στο σημείο της ζώνης δοκιμασίας όπου έχουν ακινητοποιηθεί ολιγονουκλεοτιδικοί ανιχνευτές αναγνώρισης του συγκεκριμένου είδους νοθείας. Αρχικά, διερευνήθηκε η εκλεκτικότητα της αντίδρασης PCR και βελτιστοποιήθηκαν οι συνθήκες διάκρισης των φυτικών ελαίων τόσο της PCR, όσο και του βιοαισθητήρα. Έπειτα, μελετήθηκαν τρεις τύποι ανίχνευσης νοθείας ελαιολάδου (διπλή, τριπλή και πολλαπλή) με την ανάπτυξη βιοαισθητήρα ξηρών αντιδραστηριών. Ο προτεινόμενος βιοαισθητήρας DNA είναι ειδικός, απλός στον σχεδιασμό και στη χρήση του και παρέχει γρήγορα αποτελέσματα (15-20 min). Εμφάνισε πολύ καλή ανιχνευσιμότητα, ικανότητα να ανιχνεύει ποσοστά νοθείας μόλις 5% για τα έλαια σησαμιού, σόγιας και ηλίανθου και έως 10% για το καλαμποκέλαιο. Τέλος, παρουσίασε εξαιρετική επαναληψιμότητα σε όλους τους τύπους ανίχνευσης νοθείας ελαιολάδου με αρκετά χαμηλές τιμές %CV. | |
| dc.description.translatedabstract | In the last decades, a large number of analytical methods have been developed to detect the adulteration of olive oil by other plant oils. The main categories include chromatographic and spectroscopic methods such as HPLC, GC, NMR, FT-IR and MS. However, the analytes detected by these methods are chemical components (metabolites), whose concentration and structure may vary between varieties, geographical areas of growth and environmental and weather conditions. This has led to an increasing interest in the development of molecular methods, as the DNA sequence of plant oil is exclusively linked to the species or varieties and is not influenced by environmental factors. Biosensors are one of the newest and most innovative strategies to detect adulteration of olive oil with other plant oils. In this Master's thesis, a new molecular method was developed that allows the detection of olive oil adulteration with other plant oils. The method involves three steps DNA isolation from five plant oils, PCR amplification using a plant-oil specific primer mixture and finally, detection of the PCR products with a multiple dry reagent strip type biosensor. The presence of adulteration is confirmed by the appearance of a red spot on the test zone where oligonucleotide probes identifying the specific adulterant species have been immobilised. Initially, the selectivity of the PCR reaction was investigated and the conditions for the plant-oil discrimination of both the PCR and the biosensor were optimised. Then, three types of olive oil adulteration detection (double, triple and multiple) were studied by developing the dry reagent strip type biosensor. The proposed DNA biosensor is specific, simple in design and use and provides fast results (15-20 min). It showed very good detectability, ability to detect adulteration rates as low as 5% for sesame, soybean and sunflower oils and up to 10% for corn oil. Finally, it showed excellent repeatability across all types of detection of olive oil adulteration with quite low %CV values. | |
| dc.identifier.uri | https://hdl.handle.net/10889/27045 | |
| dc.language.iso | el | |
| dc.subject | Νοθεία ελαιολάδου | |
| dc.subject | Πολλαπλή PCR | |
| dc.subject | Ειδικοί εκκινητές για κάθε φυτικό έλαιο | |
| dc.subject | Βιοαισθητήρες τύπου ταινίας ξηρών αντιδραστηρίων | |
| dc.subject | Νανοσωματίδια χρυσού | |
| dc.subject.alternative | Olive oil adulteration | |
| dc.subject.alternative | Multiplex PCR | |
| dc.subject.alternative | Plant-oil specific primers | |
| dc.subject.alternative | Dry reagent strip type biosensors | |
| dc.subject.alternative | DNA | |
| dc.subject.alternative | Gold nanoparticles | |
| dc.title | Μοριακή μέθοδος ελέγχου της αυθεντικότητας του ελαιολάδου | |
| dc.title.alternative | Molecular method for olive oil authentication testing |