Διερεύνηση της επίδρασης κινολινικών παραγώγων στη βιωσιμότητα κυτταρικών σειρών καρκίνου του πνεύμονα
Loading...
Date
2024-09-24
Authors
Χατζηφούντα, Μαρία-Άννα
Journal Title
Journal ISSN
Volume Title
Publisher
Abstract
Ο καρκίνος του πνεύμονα αποτελεί την πιο θανατηφόρα μορφή καρκίνου παγκοσμίως και προκαλείται από ποικιλία αιτιών. Στη βιβλιογραφία αναδεικνύεται ότι τα κινολινικά παράγωγα επηρεάζουν σημαντικά την εξέλιξη του καρκίνου και ο στόχος της παρούσας εργασίας είναι να αναδείξει την πιθανή αντικαρκινική δράση δύο νέων ενώσεων αυτού του είδους. Η διπλωματική εργασία επικεντρώνεται στην διερεύνηση της επίδρασης δύο κινολινικών παραγώγων, SV-439-6B και SF-250, στη βιωσιμότητα και στους ρυθμούς απόπτωσης και νέκρωσης ανθρώπινων κυτταρικών σειρών μη μικροκυτταρικού καρκίνου του πνεύμονα, συγκεκριμένα των EKVX και A549. Για τον σκοπό αυτό, ακολουθείται το εξής πρωτόκολλο: καλλιέργεια κάθε κυτταρικής σειράς υπό ελεγχόμενες συνθήκες. Ακολούθως, γίνεται προσθήκη του κινολινικού παραγώγου σε διάφορες τελικές συγκεντρώσεις, σε συνθήκες εκθετικής φάσης ανάπτυξης της καλλιέργειας. Ο έλεγχος της βιωσιμότητας και του αριθμού κυττάρων σε διαδικασία απόπτωσης, γίνεται ανά καθορισμένα χρονικά διαστήματα από τη στιγμή της προσθήκης του κινολινικού παραγώγου και σε άμεση σύγκριση με κύτταρα της ίδιας σειράς, τα οποία καλλιεργούνται υπό φυσιολογικές συνθήκες χωρίς την προσθήκη κινολινικού παραγώγου. Ο έλεγχος αποπτωτικής διαδικασίας γίνεται με κυτταρομετρία ροής (BD FACSMelody™ Cell Sorter) και προηγούμενη χρώση των κυττάρων με Αννεξίνη και η μελέτη νέκρωσης υλοποιείται με τη χρήση της χρωστικής Trypan Blue και μικροσκοπική παρατήρηση σε αιμοκυτταρόμετρο. Η έρευνα ολοκληρώνονται με διερεύνηση των επιπέδων συνολικής μεθυλίωσης του γονιδιώματος, για τη σύγκριση του επιγονιδιώματος μεταξύ των κυττάρων που είχαν λάβει φάρμακο και των ακατέργαστων κυττάρων, με την τεχνική υψηλής αναλυτικής ακρίβειας υγρής χρωματογραφίας συζευγμένης με φασματομετρία μάζας LC-MS/MS, ενώ γίνονται συμπληρωματικές μελέτες για στοχευμένο έλεγχο μεθυλίωσης σε τμήματα μεμονωμένων γονιδίων, των ZBTB7A, LINE-1 και SIN3A, με τη τεχνική της πυροαλληλούχισης (Pyrosequencing). Φαίνεται πως και τα δύο φάρμακα επιδρούν στη βιωσιμότητα των δύο κυτταρικών σειρών, με βέλτιστα αποτελέσματα να δίνει το SF-250 στα EKVX, παρουσιάζοντας IC50 στα 30 μΜ και νέκρωση του 50% της καλλιέργειας, στην ίδια συγκέντρωση. Όσον αφορά την μεθυλίωση του DNA, δεν παρατηρείται σημαντική επίδραση του SF-250, στη συνολική μεθυλίωση του γονιδίωματος, αλλά ούτε και στα μεμονωμένα γονίδια, της σειράς Α549, που ελέγχθηκαν.
Description
Keywords
Καρκίνος του πνεύμονα, Κινολινικό παράγωγο, Απόπτωση, Νέκρωση, Μεθυλίωση