Διερεύνηση της επίδρασης κινολινικών παραγώγων στη βιωσιμότητα κυτταρικών σειρών καρκίνου του πνεύμονα
| datacite.contributor.RelatedPerson | Ρασσιάς, Γεράσιμος | |
| datacite.contributor.RelatedPerson | Σταθόπουλος, Κωνσταντίνος | |
| datacite.contributor.Supervisor | Σγουρού, Αργυρώ | |
| dc.contributor.author | Χατζηφούντα, Μαρία-Άννα | |
| dc.contributor.other | Chatzifounta, Maria-Anna | |
| dc.date.accessioned | 2024-10-03T06:47:15Z | |
| dc.date.available | 2024-10-03T06:47:15Z | |
| dc.date.issued | 2024-09-24 | |
| dc.degree | masterThesis | |
| dc.description.abstract | Ο καρκίνος του πνεύμονα αποτελεί την πιο θανατηφόρα μορφή καρκίνου παγκοσμίως και προκαλείται από ποικιλία αιτιών. Στη βιβλιογραφία αναδεικνύεται ότι τα κινολινικά παράγωγα επηρεάζουν σημαντικά την εξέλιξη του καρκίνου και ο στόχος της παρούσας εργασίας είναι να αναδείξει την πιθανή αντικαρκινική δράση δύο νέων ενώσεων αυτού του είδους. Η διπλωματική εργασία επικεντρώνεται στην διερεύνηση της επίδρασης δύο κινολινικών παραγώγων, SV-439-6B και SF-250, στη βιωσιμότητα και στους ρυθμούς απόπτωσης και νέκρωσης ανθρώπινων κυτταρικών σειρών μη μικροκυτταρικού καρκίνου του πνεύμονα, συγκεκριμένα των EKVX και A549. Για τον σκοπό αυτό, ακολουθείται το εξής πρωτόκολλο: καλλιέργεια κάθε κυτταρικής σειράς υπό ελεγχόμενες συνθήκες. Ακολούθως, γίνεται προσθήκη του κινολινικού παραγώγου σε διάφορες τελικές συγκεντρώσεις, σε συνθήκες εκθετικής φάσης ανάπτυξης της καλλιέργειας. Ο έλεγχος της βιωσιμότητας και του αριθμού κυττάρων σε διαδικασία απόπτωσης, γίνεται ανά καθορισμένα χρονικά διαστήματα από τη στιγμή της προσθήκης του κινολινικού παραγώγου και σε άμεση σύγκριση με κύτταρα της ίδιας σειράς, τα οποία καλλιεργούνται υπό φυσιολογικές συνθήκες χωρίς την προσθήκη κινολινικού παραγώγου. Ο έλεγχος αποπτωτικής διαδικασίας γίνεται με κυτταρομετρία ροής (BD FACSMelody™ Cell Sorter) και προηγούμενη χρώση των κυττάρων με Αννεξίνη και η μελέτη νέκρωσης υλοποιείται με τη χρήση της χρωστικής Trypan Blue και μικροσκοπική παρατήρηση σε αιμοκυτταρόμετρο. Η έρευνα ολοκληρώνονται με διερεύνηση των επιπέδων συνολικής μεθυλίωσης του γονιδιώματος, για τη σύγκριση του επιγονιδιώματος μεταξύ των κυττάρων που είχαν λάβει φάρμακο και των ακατέργαστων κυττάρων, με την τεχνική υψηλής αναλυτικής ακρίβειας υγρής χρωματογραφίας συζευγμένης με φασματομετρία μάζας LC-MS/MS, ενώ γίνονται συμπληρωματικές μελέτες για στοχευμένο έλεγχο μεθυλίωσης σε τμήματα μεμονωμένων γονιδίων, των ZBTB7A, LINE-1 και SIN3A, με τη τεχνική της πυροαλληλούχισης (Pyrosequencing). Φαίνεται πως και τα δύο φάρμακα επιδρούν στη βιωσιμότητα των δύο κυτταρικών σειρών, με βέλτιστα αποτελέσματα να δίνει το SF-250 στα EKVX, παρουσιάζοντας IC50 στα 30 μΜ και νέκρωση του 50% της καλλιέργειας, στην ίδια συγκέντρωση. Όσον αφορά την μεθυλίωση του DNA, δεν παρατηρείται σημαντική επίδραση του SF-250, στη συνολική μεθυλίωση του γονιδίωματος, αλλά ούτε και στα μεμονωμένα γονίδια, της σειράς Α549, που ελέγχθηκαν. | |
| dc.description.translatedabstract | Lung cancer is of the most lethal forms of cancer worldwide and it is developed by a variety of causes. Literature highlights that quinoline derivatives significantly influence cancer progression, and this study aims to explore the potential anticancer activity of two new compounds of this class. The present thesis focuses on investigating the effects of two quinoline derivatives, SV-439-6B and SF-250, on the viability and rates of apoptosis and necrosis in human non-small cell lung cancer (NSCLC) cell lines, specifically EKVX and A549. For this purpose, the following protocol is followed: each cell line is cultured under controlled conditions. Subsequently, the quinoline derivative is added at various final concentrations during the exponential growth phase of the culture. Viability and the number of cells undergoing apoptosis and necrosis are assessed at specified time intervals from the moment of the quinoline derivative's addition and are directly compared to cells of the same line cultured under normal conditions without drug treatment. Apoptotic processes are analyzed using flow cytometry (BD FACSMelody™ Cell Sorter) with prior staining of the cells with Annexin V, while necrosis is studied using Trypan Blue staining. The study is completed by investigating the overall methylation levels of the genome to compare epigenome of cells treated with the drug to untreated cells, utilizing the high-precision LC-MS/MS technique. Additional studies focus on targeted methylation analysis of specific gene segments, namely ZBTB7A and SIN3A, using the Pyrosequencing technique. Results indicate that both drugs affect the viability of the two cell lines, with SF-250 showing optimal results in EKVX cells, presenting an IC50 of 30 μM and necrosis of half the culture's cells at the same concentration. Regarding DNA methylation, SF-250 does not significantly affect either the global genome or the individual genes examined in the A549 cell line. | |
| dc.identifier.uri | https://hdl.handle.net/10889/28140 | |
| dc.language.iso | el | |
| dc.subject | Καρκίνος του πνεύμονα | |
| dc.subject | Κινολινικό παράγωγο | |
| dc.subject | Απόπτωση | |
| dc.subject | Νέκρωση | |
| dc.subject | Μεθυλίωση | |
| dc.subject.alternative | Lung cancer | |
| dc.subject.alternative | NSCLC | |
| dc.subject.alternative | Quinoline derivative | |
| dc.subject.alternative | Apoptosis | |
| dc.subject.alternative | Necrosis | |
| dc.subject.alternative | Methylation | |
| dc.title | Διερεύνηση της επίδρασης κινολινικών παραγώγων στη βιωσιμότητα κυτταρικών σειρών καρκίνου του πνεύμονα | |
| dc.title.alternative | Invastigating the effect of quinoline agents on the viability of lung cancer cell lines |