Ο μεταγραφικός παράγοντας coup-TF και το γονιδιακό ρυθμιστικό δίκτυο στο νευρικό σύστημα του αχινού Paracentrotus lividus
Loading...
Date
Authors
Γούβη, Γεωργία
Journal Title
Journal ISSN
Volume Title
Publisher
Abstract
Ο Coup TF (Nr2F1), αποτελεί ένα μέλος της υπέρ-οικογένειας των πυρηνικών υποδοχέων και χαρακτηρίζεται ως ορφανός υποδοχέας. Είναι απαραίτητος παράγοντας στην νευρογένεση του εμβρύου του αχινού, όπως και όλων των μεταζώων. Εκφράζεται στο στοματικό εξώδερμα [ventral ή oral ectoderm (OE)] του εμβρύου, το οποίο περιλαμβάνει δύο κύριες νευρογενείς περιοχές την βλεφαριδωτή ζώνη [ciliary band (CB)], και το πρόσθιο νευροεξώδερμα [anterior neural ectoderm (ANE)]. Χωροειδικά και χρονοειδικά πρότυπα έκφρασης των ρυθμιστικών γονιδίων απαιτούνται για την δημιουργία ενός ρυθμιστικού δικτύου, gene regulatory network (GRN). Στην παρούσα μελέτη διερευνάται το πρότυπο έκφρασης των γονιδίων του ANE και του στοματικού εξωδέρματος όπως Six3, Fez, Ets4, Not, Sip1, Foxq2 και Gsc στην πρώιμη εμβρυική ανάπτυξη, με την χρήση qPCR και in situ υβριδοποίησης (WMISH). Επιπροσθέτως μελετάται το πρότυπο έκφρασης του γονιδίου SynB που χρησιμοποιείται ως μάρτυρας νευρικών κυττάρων. Το υπάρχων υπόδειγμα ρυθμιστικού δικτύου για το στοματικό εξώδερμα του εμβρύου του αχινού, το οποίο εμπεριέχει τo λιγότερο μελετημένo GRN-υπoδίκτυο του ΑΝΕ, δεν περιλαμβάνει το γονίδιο Coup-TF. Στόχος μας είναι να αναγνωρίσουμε τις ρυθμιστικές αλληλεπιδράσεις μεταξύ του Coup-TF και τον προαναφερθέντων γονιδίων, ώστε να τοποθετηθεί ο Coup-TF μέσα στο υποδίκτυο του ANE του εμβρυικού GRN. Για το σκοπό αυτό, πραγματοποιήσαμε μια σειρά πειραμάτων με έμβρυα που είχαν ενεθεί με ειδικά αντινοηματικά ολιγονουκλεοτίδια (morpholino) έναντι του μεταγράφου του Coup-TF, τα οποία δίνουν σαν αποτέλεσμα ακραίο φαινότυπο και απώλεια του ενδογενούς Coup-TF mRNA μετά από WMISH. Επίσης, αυτός ο φαινότυπος ακολουθείται από την έλλειψη των σεροτονεργικών νευρώνων και την απαλοιφή ή εκτοπική έκφραση αρκετών σημαντικών γονιδίων στην νευρογένεση του ANE και της CB. Τέλος παρουσιάζεται ένα προσωρινό υποδίκτυο στο οποίο φαίνονται οι ειδικές αλληλεπιδράσεις μεταξύ του Coup-TF και άλλων ρυθμιστικών γονιδίων στο πρόσθιο νευροεξώδερμα.
Description
Keywords
Νευρογένεση, Αχινός, Ρυθμιστικά δίκτυα, Βλεφαριδωτή ζώνη