Επίδραση ψυχρού πλάσματος στην βιωσιμότητα κυττάρων και στη πρόσληψη λιποσωμικής Doxorubicin από καρκινικά και μη-καρκινικά κύτταρα
Loading...
Date
Authors
Πεφάνη-Αντιμησιάρη, Κωνσταντίνα
Journal Title
Journal ISSN
Volume Title
Publisher
Abstract
Τα λιποσώματα είναι σφαιρικές λιπιδικές δομές, σε μορφή διπλοστιβάδας, στην κλίμακα του νανομέτρου. Βρίσκουν εφαρμογή ως μοντέλα βιολογικών μεμβρανών και ως φορείς φαρμάκων (λόγω της ευέλικτης δομής τους, και των πολλών πλεονεκτημάτων τους σε σύγκριση με άλλους νανοφορείς). Το ψυχρό πλάσμα ατμοσφαιρικής πίεσης (Cold Atmospheric Pressure Plasma, CAPP) είναι ιονισμένο αέριο που αποτελείται από ισάριθμο σύνολο θετικών και αρνητικών φορτίων, ενώ είναι επίσης χημικά ενεργό μέσο χαμηλής θερμοκρασίας και πίεσης και βρίσκεται εκτός θερμοδυναμικής ισορροπίας. Μια εκ’ των πολλών βιοϊατρικών εφαρμογών του CAPP είναι η αντικαρκινική θεραπεία. Στόχος της παρούσας μεταπτυχιακής εργασίας είναι η διερεύνηση της επίδρασης του CAPP στα κύτταρα (καρκινικά και φυσιολογικά), η μελέτη της αλληλεπίδρασης του CAPP με το αντικαρκινικό φάρμακο δοξορουβικίνη (DOX), και με τη λιποσωμική μορφή του (Lip-DOX), κατά την συγχορήγηση τους στα κύτταρα, και πιο συγκεκριμένα ο τρόπος που επηρεάζει το CAPP την πρόσληψη της δοξορουβικίνης από τα κύτταρα. Οι κυτταρικές σειρές που χρησιμοποιήθηκαν ήταν η B16-F10 (καρκινικά κύτταρα ζωικής προέλευσης), η SK-MEL-2 (ανθρώπινα καρκινικά κύτταρα) και η HEK-293 (ανθρώπινα φυσιολογικά κύτταρα).
Παρασκευάστηκαν λιποσώματα SUV (DSPC/Chol/PEG 2:1:0,8) με χρήση της τεχνικής ενυδάτωσης λεπτού υμενίου για την παραγωγή MLV λιποσωμάτων και ακίδας υπερήχων για την μείωση του μεγέθους των λιποσωμάτων. Στη συνέχεια, τα λιποσώματα φορτώθηκαν με δοξορουβικίνη και έγινε διαχωρισμός των λιποσωμάτων από το ελεύθερο φάρμακο με χρήση υπερφυγοκέντρου.
Τα πειράματα που πραγματοποιήθηκαν για την διερεύνηση της βιωσιμότητας κυττάρων, και του μηχανισμού με τον οποίο αυτή επηρεάζεται από: (i) ακτινοβόληση με πλάσμα (CAPP), (ii) χορήγηση δοξορουβικίνης (ελεύθερης και λιποσωμικής), και (iii) από τον συνδυασμό πλάσματος με δοξορουβικίνη, έγιναν με τις τεχνικές MTT, Trypan Blue και Ανεξίνης-Κυτταρομετρίας (σε κύτταρα B16-F10, SK-MEL-2 και HEK-293). Για την διερεύνηση του τρόπου που επηρεάζει η ακτινοβόληση με πλάσμα (CAPP) την πρόσληψη της δοξορουβικίνης (ελεύθερης ή λιποσωμικής) από τα κύτταρα, μετρήθηκε η ένταση φθορισμού της δοξορουβικίνης με φθορισμόμετρο και με μηχάνημα FACS, και έγινε αντίστοιχη απεικονιστική μελέτη με συνεστιακή μικροσκοπία λέιζερ (σε κύτταρα B16-F10). Τέλος, μελετήθηκε η κλωνογεννητική ικανότητα των κυττάρων B16-F10 μετά από ακτινοβόληση με πλάσμα, καθώς και μετά από προσθήκη δοξορουβικίνης (ελεύθερης και λιποσωμικής), καθώς και συνδυασμού πλάσματος και δοξορουβικίνης.
Τα πειραματικά αποτελέσματα έδειξαν ότι το πλάσμα περιορίζει την βιωσιμότητα των καρκινικών κυττάρων- πιθανότατα με αναστολή της ανάπτυξης και του πολλαπλασιασμού τους- σε πολύ μεγαλύτερο βαθμό από ότι στα φυσιολογικά κύτταρα. Ο συνδυασμός δοξορουβικίνης (ελεύθερης και λιποσωμικής) με πλάσμα προκαλεί σημαντικά μεγαλύτερη μείωση της βιωσιμότητας. Η πρόσληψη της δοξορουβικίνης από τα κύτταρα έδειξε να μην επηρεάζεται από τον συνδυασμό με το πλάσμα, γεγονός που ενδεχομένως οφειλόταν στις συνθήκες που επιλέχθηκαν για να είναι δυνατή η συλλογή αξιόπιστων μετρήσεων. Το πλάσμα έδειξε να περιορίζει την κλωνογεννητική ικανότητα των κυττάρων και να την εξαλείφει παντελώς όταν είναι σε συνδυασμό με δοξορουβικίνη (ελεύθερη και λιποσωμική).
Description
Keywords
Λιποσώματα, Ψυχρό πλάσμα, Δοξορουβικίνη, Κύτταρα